La determinazione in vitro dell’attività scavenger sull’ossido di azoto può essere un utile indice dell’attività antinfiammatoria. L’ossido nitrico (NO), infatti, è un radicale libero a emivita breve e un messaggero intercellulare prodotto da una varietà di cellule di mammifero, come i macrofagi, neutrofili, piastrine, fibroblasti, cellule endoteliali, neuronali e muscolari lisce.

NO media una varietà di eventi biologici che vanno dalla vasodilatazione, neurotrasmissione, inibizione dell’adesione e dell’aggregazione piastrinica, ma risulta essere coinvolto anche in una vasta gamma di patologie a carattere infiammatorio.

L’azione scavanger nei confronti dell’ossido nitrico è stata determinata secondo il metodo di Griess.

La reazione viene condotta utilizzando il reattivo di Griess, formato da una miscela di sulfanilamide e 1-naftiletilendiammina, in ambiente acido. In queste condizioni il nitrito tende a formare acido nitroso, il quale reagendo con la sulfanilamide produce un sale di diazonio (reazione di diazotazione).

Il sale di diazonio, a sua volta, dà una reazione di copulazione con l’1-naftiletilendiammina originando un colorante azoico di colorazione viola che presenta un picco massimo di assorbimento alla lunghezza d’onda di 540 nm.

Il DPPH (2,2’-diphenyl-1-picrylhydrazyl) è un radicale libero organico con un picco massimo di assorbimento a 515-528 nm e permette di valutare l’attività antiossidante di diversi composti mediante una misura di tipo spettrofotometrico.

La reazione prevede la riduzione del radicale DPPH da parte delle molecole antiossidanti con formazione di un composto di colore giallo, la difenilpicrilidrazina. L’entità della reazione di riduzione dipende dalla capacità delle molecole di fungere da donatori di elettroni.

Al fine di valutare le proprietà antiossidanti del prodotto in esame, l’attività scavenger contro i radicali DPPH è stata determinata addizionando HydraOIL a 9,9 ml di una soluzione di DPPH (200 µM) preparata in etanolo.
L’assorbanza è stata letta dopo 15 min a 517 nm.

I dati sono stati espressi come percentuale di inibizione e riportati in figura 2.

L’ABTS (2,2′-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)) è un radicale di natura idrofila che presenta un massimo di assorbimento intorno a 734 nm.

La reazione dipende dalla capacità di donare atomi di idrogeno da parte dell’antiossidante. Il metodo si basa sulla capacità degli antiossidanti agire sul catione radicale ABTS, un cromoforo blu-verde con un assorbimento caratteristico a 734 nm.

ABTS • + è stato generato dalla reazione di una soluzione acquosa di ABTS (7 mM) con persolfato di potassio 2,45 mM (K2S2O8). La miscela ottenuta è stata lasciata al buio a temperatura ambiente e, dopo 16 ore, è stata diluita con acqua distillata ad un’assorbanza di 0,999 ± 0,030 a 734 nm. 

Per valutare le proprietà antiossidanti, l’Olio di Chia è stato aggiunto ad 1 ml della soluzione ABTS finale e a 0,9 ml di acqua distillata. 

Un controllo è stato preparato nelle stesse condizioni di reazione ma utilizzando acqua distillata al posto del campione. Dopo 6 minuti, l’assorbanza è stata misurata a 734 nm.

I dati ottenuti, espressi come percentuale di inibizione del radicale e riportati in figura 1, hanno evidenziato la capacità dell’Olio di Chia di inibire il radicale.

Il DPPH (2,2’-diphenyl-1-picrylhydrazyl) è un radicale libero organico con un picco massimo di assorbimento a 515-528 nm e permette di valutare l’attività antiossidante di diversi composti mediante una misura di tipo spettrofotometrico.

La reazione prevede la riduzione del radicale DPPH da parte delle molecole antiossidanti con formazione di un composto di colore giallo, la difenilpicrilidrazina. L’entità della reazione di riduzione dipende dalla capacità delle molecole di fungere da donatori di elettroni.

Al fine di valutare le proprietà antiossidanti del prodotto in esame, l’attività scavenger contro i radicali DPPH è stata determinata addizionando HydraOIL a 9,9 ml di una soluzione di DPPH (200 µM) preparata in etanolo. 

L’assorbanza è stata letta dopo 15 min a 517 nm.  

I dati sono stati espressi come percentuale di inibizione e riportati in figura.

La determinazione in vitro dell’attività scavenger sull’ossido di azoto può essere un utile indice dell’attività antinfiammatoria. L’ossido nitrico (NO), infatti, è un radicale libero a emivita breve e un messaggero intercellulare prodotto da una varietà di cellule di mammifero, come i macrofagi, neutrofili, piastrine, fibroblasti, cellule endoteliali, neuronali e muscolari lisce.

NO media una varietà di eventi biologici che vanno dalla vasodilatazione, neurotrasmissione, inibizione dell’adesione e dell’aggregazione piastrinica, ma risulta essere coinvolto anche in una vasta gamma di patologie a carattere infiammatorio.

L’azione scavanger nei confronti dell’ossido nitrico è stata determinata secondo il metodo di Griess. La reazione viene condotta utilizzando il reattivo di Griess, formato da una miscela di sulfanilamide e 1-naftiletilendiammina, in ambiente acido. In queste condizioni il nitrito tende a formare acido nitroso, il quale reagendo con la sulfanilamide produce un sale di diazonio (reazione di diazotazione).

Il sale di diazonio, a sua volta, dà una reazione di copulazione con l’1-naftiletilendiammina originando un colorante azoico di colorazione viola che presenta un picco massimo di assorbimento alla lunghezza d’onda di 540 nm.
I dati ottenuti hanno evidenziato la capacità dell’Olio di Sacha Inchi di inibire il radicale.

La migrazione cellulare rappresenta uno step importante per la guarigione delle ferite. Per gli studi biologici sulla migrazione cellulare è stata utilizzata la metodica Wound-healing Scratch Assay.

Questo saggio si basa sull’osservazione che, se si crea un varco artificiale chiamato “scratch” su cellule in monostrato confluente in modo da simulare una ferita, le cellule che si trovano lungo i bordi dello scratch tendono a muoversi attraverso lo spazio vuoto fino a chiuderlo, ricostituendo di nuovo i contatti cellula-cellula.

Il saggio è destinato a valutare la capacità del campione in esame di promuovere la rigenerazione cellulare e, quindi, di contribuire al processo di guarigione delle ferite.

Gli studi sono stati eseguiti su linea cellulare di fibroblasti umani trattati con il campione in esame per 24 h

Le radiazioni UV sono una sorta di importanti fattori che generano stress ossidativo. Le radiazioni UV infatti possono indurre un aumento di radicali liberi e quindi causare la perossidazione dei lipidi.

L’effetto inibitorio sulla perossidazione lipidica indotta dai raggi UV dell’olio di Karanja è stato determinato secondo il metodo dell’acido tiobarbiturico con alcune modifiche.

Una miscela contenente 1 ml di10 mg/ml di lecitina (sciolta in PBS, 10 mM pH7,4) e 1 ml di diverse concentrazioni di Olio di Karanja , è stata esposta a UVC per 30 min dopo 30 min di incubazione a 37°C. Successivamente 2 ml di miscela di TCA-TBA-HCl (15% TCA, 0,4% TBA, 2% HCl) sono stati aggiunti e portati a ebollizione per 15 min.

Dopo il raffreddamento in acqua ghiacciata, le provette sono state centrifugate a 1000 giri/min per 10 min, e l’assorbanza del supernatante è stata misurata a 535 nm utilizzando uno spettrofotometro.

L’Indice di resistenza (IR), ovvero la capacità di resistere alla perossidazione, è stata calcolata come segue:
IR＝（ODn－ODs）/ODn×100%
dove ODn è l’assorbanza del controllo. ODs è l’assorbanza della soluzione di reazione del campione.

I dati ottenuti dagli studi condotti hanno evidenziato la capacità dell’OLIO DI KARANJIA di inibire la perossidazione lipidica indotta dalla radiazione UV.

La valutazione biologica in vitro della presenza di granuli lipidici è stata determinata tramite Saggio Oil-Red- O eseguito su cellule 3T3L1. 

I risultati sono stati riportati in Figura ed hanno evidenziato la capacità dell’olio di CHAULMOOGRA nel ridurre il contenuto intracellulare di lipidi negli adipociti 3T3-L1.

Per tale determinazione è stato eseguito un protocollo E.L.IS.A., con un approccio di tipo indiretto, per l’identificazione di 5-α-reduttasi nel mezzo di coltura delle cellule HHDPCs trattate.

In base ai risultati della vitalità cellulare, per il presente test è stata utilizzata una concentrazione di campione pari a 4 mg/ml. Un campione di controllo è stato preparato sostituendo il volume di campione con un uguale volume di mezzo di coltura. 

La finasteride è stata utilizzata come controllo positivo. I risultati sono stati riportati in figura. 

Le cellule trattate con Olio di Marula alla concentrazione e ai tempi saggiati hanno evidenziato una riduzione dell’espressione dell’enzima 5-α-reduttasi, in particolare a 24h dal trattamento è stata registrata una riduzione di circa il 40% dei livelli in riferimento al controllo.